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3、【答案】C【解析】【详解】①:量变与质变的关系属于辩证法,①不符合题意,排除。③:坚持以联系的观点看待问题属于辩证法,③与题意不符,排除。②④:奥密克戎变异毒株在全球总体风险评估为“非常高”,可能在世界广泛传播说明实践是认识发展的动力,人们不断的对病毒进行分析研究,提高对其的认知,坚持在实践中发现对病毒的认识,在实践中检验真理,②④正确。故选C。
25.(9分)定点诱变技术是近年来生物工程研究中发展迅速的一个领域。通过定点诱变可以在体外改造目的DNA分子,进而研究基因的表达以及蛋白质的结构与功能之间的关系。经典的大引物PCR定点诱变技术成为基于PCR的定点诱变技术中应用最普遍的方法,操作过程如图1。研究者欲改造某基因并将其导入大肠杆菌的质粒中保存,该质粒含有氨苄青霉素抗性基因、LαcZ基因及一些酶切位点,结构如图2。回答下列问题:引物15PCRI目的基因改良基因诱变引物·CCGG限制酶识别序列及切割位点CTAG大引物Sma I XmaIBRII AGATCTBglINhe I GCTAGCPCR23目的基因LacZNhe ISma I CCCGGG引物2①基因●大引物②Xma I CCCGGG氨苄青霉素抗性基因LacZ基因编码产生的酶能分改良基因解鄂半乳糖苷,产生蓝色物质,使菌落呈现蓝色,否则大引物伽CR法定点诱变(圆点为突变位点)菌落为白色1复制原点2(1)利用大引物PCR进行定点诱变需要进行两轮PCR(PCR1和PCR2),在PCR1中,至少需要个循环才能获得相应的大引物模板。在P℃R2中,要获得带有诱变点的改良基因,引物应选用大引物两条链中的(填“①”或“②”)。(2)为实现质粒和改良基因的高效连接,选用限制酶XmaI而不选用限制酶SaI的原因是。为将改良基因构建在质粒上,还需要等酶。(3)在构建改良基因表达载体时,有的质粒含有改良基因,有的质粒为空白质粒,将含上述元件的溶液加入到大肠杆菌菌液中,适宜温度下培养一段时间后,再将菌液涂布在含的平板上,含有重组质粒的菌落将呈(填“蓝”或“白”)色。【答案】(9分,除标注外,每空2分)(1)2(1分)②(1分)(2)SmaI的酶切末端为平末端,无法与改良基因上的黏性末端连接BglⅡ、DNA连接酶(3)氨苄青霉素和B半乳糖苷白(1分)【解析】(1)由图可知,大引物的两条链均带有突变位,点,进行第一轮循环,得到一个不含突变位,点的DNA,一个有一条链含有突变位点的DNA,进行第二轮循环,即可得到三个不含突变位点的DNA和一个两条链均含突变位点的DNA,即大引物;从大引物和目的基因的结合位,点分析,要获得带有诱变点的改良基因,引物应选用大引物两条链中的②。(2)限制酶SaI的酶切末端为平末端,无法与改良基因上的黏性末端连接;由酶切位,点分析,除使用限制酶XmaI外,还需使用限制酶BglⅡ切出相应黏性末端与改良基因CTAG一侧进行配对。(3)因此为了筛选成功导入质粒的大肠杆菌并同时鉴别转入重组质粒的大肠杆菌,将上述元件的溶液加入到大肠杆菌菌液中,适宜温度下培养一段时间后,再将菌液涂布在含氨苄青霉素和阝半乳糖苷的平板上。重组质粒和空白质粒上均含有氨苄青霉素的抗性基因,且LcZ基因编码的酶能分解B半乳糖苷,产生蓝色物质,所以应加入B半乳糖苷进行检测质粒上是否含有改良基因;由于重组质粒的LcZ基因在重组过程中被切断,不能编码相应的酶分解阝半乳糖苷,菌落表现为白色,导入空质粒的大肠杆菌菌落表现为蓝色。