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14.科学家将增强基因表达水平的调控因子导入野生型水稻(WT)体内，获得核基因HRD表达增强的转基因植株HRDA和HRDB。在干旱条件下，WT、HRDA、HRDB的根生物量（根系干重）及叶片蒸腾速率的测定结果如图所示。下列叙述错误的是320.30.2WT HRDA HRDB0WT HRDA HRDB12A.WT植株的叶肉细胞中都存在HRD基因B.HRD基因具有促进根细胞生长和调节气孔导度的功能C.HRDA和HRDB植株的根细胞中HRD基因的表达水平不同D.与WT和HRDB相比，HRDA更适应干旱环境【答案】D【解析】WT植株为野生型植株，只是HRD基因表达量偏低，故其叶肉细胞中含有HRD基因；图1显示，转基因水稻的根生物量多于非转基因水稻，图2显示，转基因水稻蒸腾速率小于非转基因水稻，失水减少，从而使得转基因水稻抗旱能力增强，故HRD基因具有促进根细胞生长和调节气孔导度的功能；图1显示，HRDA和HRDB植株的根生物量不同，故在根细胞中HRD基因的表达水平不同；图1显示，HRDB植株的根生物量高于HRDA和WT植株的根生物量，图2显示，HRDB植株的蒸腾速率低于HRDA和WT植株的蒸腾速率，故与WT和HRDA相比，HRDB更适应千旱环境。

24.(10分)甜柿的自然脱涩与乙醛代谢关键酶基因(PDC)密切相关，推测涩味程度可能与PDC基因的表达情况有关。为筛选PDC基因的调控蛋白，科研人员构建了质粒A和质粒G(如图1、图2所示)，利用酵母菌进行了相关实验探究。限制酶切割位点融合蛋白尿嘧啶合AD基因启动子待金担子素抗3蛋AD蛋白质粒A性基因（无质粒GAD基因转录→基因启动因子)2◇◇◇IAD基因终止子PDC基因金担子素启动子区段注：金担子素是一种抗真菌药物抗性基因23(1)启动子位于基因首端，是的位点，启动子区域还存在着许多调控蛋白的结合位点，可影响基因的转录水平。PDC基因的启动子序列未知，为获得大量该基因启动子所在片段，可利用限制酶将基因组DNA进行酶切，然后在的作用下将已知序列信息的接头片段连接在PDC基因的上游，根据接头片段和PDC基因编码序列设计引物进行(2)利用质粒A构建含有PDC基因启动子片段的重组质粒并导入代谢缺陷型酵母菌，用不含的培养基可筛选出成功转化的酵母菌Y1H。质粒G上的AD基因表达出的AD蛋白与启动子足够靠近时，能够激活后续基因转录，因此需获得待测蛋白与AD蛋白的融合蛋白用于后续筛选。科研人员从甜柿中提取RNA,将逆转录形成的各种与质粒G连接后导入酵母菌，此时应选择质粒G中的位点(填序号1~5)作为cDNA的插入位点，最终获得携带不同cDNA片段的酵母菌群Y187。(3)重组酵母菌Y187与Y1H能够进行接合生殖，形成的接合子含有两种酵母菌质粒上的所有基因。若接合子能在含有金担子素的培养基中生存，则推测待测蛋白是PDC基因的调控蛋白，请结合图3阐述作出该推测的理由：(4)筛选出PDC基因的调控蛋白后，为满足生产需要对其进行改良，这种技术属于工程，该工程的起点是【答案】(10分，除标注外，每空1分)(1)RNA聚合酶识别和结合DNA连接酶PCR扩增(2)尿嘧啶cDNA2(3)接合子中待测蛋白与AD蛋白形成了融合蛋白，若待测蛋白是PDC基因的调控蛋白，就能与PDC基因启动子结合，AD蛋白也能靠近PDC基因启动子并激活金担子素抗性基因的表达，使酵母菌表现出金担子素抗性(2分)(4)蛋白质预期蛋白质的功能【解析】(I)启动子是RNA聚合酶识别和结合的位，点，直接决定转录起始。限制酶切割后需要在DNA连接酶的作用下连接；已知接头片段连接在PDC基因的上游，且已知序列信息，则可以根据接头片段与PDC基因编码序列设计引物进行PCR扩增。(2)由质粒A的图谱可知带有选择功能的基因片段有尿嘧啶合成基因、金担子素抗性基因两种，但是金担子素抗性基因无法启动，所以选择尿嘧啶合成基因作为选择依据，则在选择培养基配制时不加尿嘧啶。从甜柿中提取的RNA可以通过逆转录形成各种cDNA,将各种cDNA片段与质粒G连接后导入酵母菌，插入时不能破坏其他蛋白质基因的表达，而且需要插入到启动子和终止子之间才能保证表达，因此选择2作为CDNA的插入位，点。(3)依据题千，重组酵母菌Y187与Y1H形成的接合子应同时含有质粒A、质粒G,质粒A为含有PDC基因、金担子素抗性基因的质粒；质粒G为可正常表达AD蛋白、待测蛋白的质粒，接合子中待测蛋白与AD蛋白形成了融合蛋白，若待测蛋白是PDC基因的调控蛋白，就能与PDC基因启动子结合，则融合蛋白携带的AD蛋白靠近PDC基因启动子，激活PDC基因的转录，并激活金担子素抗性基因的表达，使酵母菌表现出金担子素抗性。(4)筛选出PDC基因的调控蛋白后，为满足生产需要对其进行改良，这种技术属于蛋白质工程，蛋白质工程的设计流程为预期的蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找出并改变相对应的脱氧核苷酸序列（基因）或合成新的基因→获得所需要的蛋白质，所以起点是预期蛋白质功能。