不能选择SmaI;③为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接,也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒,如图甲中也可选择用PsI和EoRI两种跟制酶(但要确保质粒上也有这两种酶的切点)。(2〕根据质粒的特点确定限制酶的种类①所选限制酶要与切割目的基因的限制酶一致,以确保臭有相同的黏性末端;②质粒作为载体必须臭备标记基因等,所以所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构,如图乙中限制酶Sma会破坏标记基因。25.(除标注外,每空1分,共11分)1)BdI和HindⅢDNA连接(2)感受态细胞四环素引物甲和引物丙TGATCCIGGATCAACTAGG( CCTAGT/都不能(4)脱分化表达5)将转基因水稻种植在喷洒适宜浓度的草甘膦农药的环境中,观察其生长状况(2分【解析】本题考查基因工程的操作与应用。1)图中信息显示:质粒的四环素抗性基因和氨苄青霉素抗性基因中都存在 BamH I的酶切位点,因此不能选择 BamH I进行酶切;目的基因的两端和载体上都有BdI和HindⅢ的酶切位点,可见用图中质粒和目的基因构建重组质粒时,应选用BlI和HindⅢ两种限制酶切割。酶切后的载体和目的基因片段,再用DNA连接酶进行连接。(2)将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化法。即用CaCl2处理农杆菌后获得感受态细胞,将其与基因表达载体混合完成转化后,在添加四环素的培养基中,经筛选1得到含基因表达载体的农杆菌。这是因为构建重组质粒时,目的基因的插入破坏了氨苄青霉素抗性基因,但四环素抗性基因却保持其结构的完整性,所以转入了重组质粒的农杆菌可在添加了四环素的培养基表面长出菌落。PCR技术要求两种引物分别和目的基因的两条单链结合,沿相反的方向合成子链,因此若用PCR鉴定图丙中的目的基因,所用的引物组成为引物甲和引物丙。(3)根据表格分析可知,经 BamH I酶切割后产生的黏性末端为g atccCCTAG G、,经BI酶切割后产生的黏性末端为T ATCA-即这两种酶切割后产生的片段具有相同的黏性ACTAG T末端。若 BamH I酶切的DNA末端与BelI酶切的DNA末端连TGATCC/ GGATCA接,连接部位的6个碱基对序列为这两种ACTAGGCCTAGT酶都不能识别该部位,因此都不能将该部位切开。(4)取某品种水稻的幼胚,进行消毒处理,接种到脱分化培养基中,水稻幼胚细胞发生脱分化形成愈伤组织,再用含基因表达载体的农杆菌侵染该愈伤组织。侵染后仍需要鉴定,根据题意可知,GUS基因和目的基因都在基因表达载体上,两者能同时表达,若检测到GUS基因成功表达,则可间接证明目的基因也成功表达。(5)结合目的基因的功能,人们通过将转基因水稻种植在喷洒适宜浓度的草甘膦农药的环境中,观察其生长状况,在个体水平检测目的基因是否成功表达。【刷有所得】选择豭制酶的技巧Pst lPsti. Sma i pst iSmaI抗病基因 ToRI: i甲1)根据目的基因两端的限制酶切点确定限制酶的种类①应选择切点位于目的基因两端的限制酶,如图甲中可选择PsI;②不能选择切点位于目的基因内部的限制酶,如图甲中
23.(除标注外,每空1分,共15分)(1)不能,图中数据是对每一对相对性状单独分析的结果,不能表明两对相对性状之间的关系。(2分)(2)DxX、DX"Y6实验思路选取品系③的雄果蝇与该果蝇杂交,观察、统计子代果蝇的表现型。(2分)预期结果和结论:若子代果蝇翅型只有裂翅,眼色只有红眼,则亲本雌果蝇的基因型为DDXX";若子代果蝇翅型只有裂翅,眼色既有红眼也有白眼,则亲本雌果蝇的基因型为DDX"X°;若子代果蝇翅型既有裂翅也有直翅,眼色只有红眼,则亲本雌果蝇的基因型为DX"X";若子代果蝇翅型既有裂翅也有直翅,眼色既有红眼也有白眼,则亲本雌果蝇的基因型为DdX°X。(4分)(3)①E或eF4②雄1:1:1【解析】本题考查伴性遗传、自由组合定律的应用和遗传实验的理解与设计。(1)根据基因自由组合定律的实质可知,位于两对同源染色体上的两对等位基因可发生自由组合。但图中的性状数据是分开分析的,故不能说明这两对等位基因是否位于两对同源染色体上,也不能证明眼色和体色的遗传符合自由组合定律。(2)由题中实验结果可以看出,子代无论雌、雄果蝇均表现为裂翅:直翅=3:1,由此推断,控制果蝇翅型的基因位于常染色体上,亲本雌雄果蝇的基因型应分别是Dd和Dd;子代雄果蝇中红眼:白眼=1:1,雌果蝇只有红眼,可推断,控制眼色的基因位于Ⅹ染色体上,红眼为显性,雄果蝇既有红眼也有白眼且两种表现型比例为1:1,由此可知,亲本雌、雄果蝇的基因型分别是X"XX染色体上,红眼为显性,雄果蝇既有红眼也有白眼且两种表现型比例为1:1,由此可知,亲本雌、雄果蝇的基因型分别是X"X和X"Y;结合上述分析,可推断亲本雌、雄果蝇的基因型分别是DdX"x和Ddx"Y。子代红眼裂翅雌果蝇(DX"X)中,就翅型来看纯合子(DD)所占的比例为3:就眼色来看纯合子(X"X")所占的比例为,因此子代红眼裂雌翅果蝇中,纯合子所占的比例为3根据实验二可知,若要判定红眼裂翅雌果蝇(DX"x-)的基因型,则需要看后代是否出现性状分离和性状分离比,再根据不同情况加以判断。三个纯合雄果蝇品系①红眼裂翅DDX"Y)、②白眼裂翅(DDXY)、③红眼直翅(ddX"Y),只有品系③可用来判定红眼裂翅雌果蝇的基因型。因此选取品系③的雄果蝇与该果蝇杂交,观察、统计子代果蝇的表现型及比例。再根据实验结果加以推理,得出结论,结论详见答案。(3)①根据题意分析可知,斑翅果蝇翅的显性性状为黄色、有斑点。若控制斑翅果蝇翅的两对等位基因分别位于两对常染色体上,则F2表现型的比例应为9:3:3:1,而F2表现型的实际比例为7:3:1:1,说明存在配子不育现象。假定为雄配子不育,由表现型的比例分析可知,不育雄配子的基因型为Ef或eF。若进一步假定为雄配子(eF)致死,则缺少4种组合,其中缺少的纯合子基因型为ceF,因此F2中纯合子的比例为4-1y16-44②为验证上述解释的正确性,可采用测交法,因为测交可以检测待测个体产生的配子类型及比例,选择F1中雄果蝇与白色无斑点雌果蝇进行测交。若后代表现型的比例为1:1:1,则说明是基因型为Hf或eF的雄配子致死。【关键点拔】由实验三的用纯合的黄色有斑点果蝇与白色无斑点果蝇进行杂交,F1全是黄色有斑点果蝇”可知,黄色对白色为显性,有斑点对无斑点为显性;由“F2表现型的比例为7:31:1”可知,控制这两对性状的基因的遗传符合基因的自由组合定律;由于题目中并未显示性状表现与性别的关系,可认为无关联,即相关基因在常染色体土,则亲本基因型分别为EEF、e;F1基因型为Eef,让F1雌、雄果蝇交配得F2,F2的基因型如下配子EFeFefEFEEFFEeFFEEFf EeFfEeFFFFEeFfEfEEFfeFfEEffEeffEeFrfrEef由F2表现型应该为9:3:3:1,而实际比例为7:3:1:1,对照发现是黄色有斑点类型和某种单显类型各减少了两份导致的,结合上述分析,可能是表格中第二列或第三列(第二排或第三排)的基因型不存在导致,因为第二列和第三列中包含了两份双显类型和两份某种单显类型,去掉后正好是F2表现型的比例,因此可确定出现上述比例的原因是基因型为eF或Ef配子致死。
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