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转录方向HygBR?FHOOH?RSAD基因BBamH I Nhe I图1图2注：图1中A、F、B、R为引物，图2中P为启动子，T为终止子，ori为复制原点，YGFP为黄绿色荧光蛋白基因，HygB为潮霉素抗性基因，马铃薯在自然状态下不具有潮霉素抗性。(1)SAD 基因可从已知结构和功能清晰的基因中筛选,也可从中检索相关序列信息。为使 SAD 基因与载体正确连接,对 SAD 基因进行 PCR 扩增时,应选择引物,在其对应5'端分别添加限制酶的识别序列。(2)将构建成功的表达载体导人农杆菌，与马铃薯叶片共培养,利用T-DNA的特点，可将SAD基因导人马铃薯叶片细胞。（3）为探究转化过程中农杆菌侵染时间与转化效率之间的关系，以马铃薯栽培种(De)和野生种（Sc)1cm左右茎段作为受体材料进行了研究。在马铃薯与农杆菌共培养的培养基中添加,用于筛选被侵染的马铃薯茎段。将筛选出的马铃薯茎段转移至再生培养基2周后，使用365nm紫外光手电筒照射，（填“阳性”或“阴性”）转化茎段会呈现黄绿色荧光，否则茎段为红色，观察荧光，并进行记录，计算出不同侵染时间下的转化效率（荧光外植体数量/外植体总数量×100%),如图3、4。结果表明%10040我204060801020406080时间/min时间/min图3图 4(4)在一定程度上,植物的抗冻性随着细胞膜中不饱和脂肪酸含量增加而方法是高三生物学第12页（共12页）