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EcoRV EcoRVSau3A IGFP基因@抗性烟四环素限制酶EcoRVSau3A IBamH I■BamH IPo目的基因片段识别序列及CTATAGGATCG'GATC C↓②复制原点切割位点GTATAGCATGC CTAG GEcoR V③(1)过程①中用EcoR V酶切获得的目的基因具有末端，过程②表示利用PCR技术扩增目的基因，前提是要根据设计出引物，此外还需在引物的端添加相应限制酶的识别序列，以便于P1的构建和筛选。(2)过程③中，质粒Po需用限制酶切割，与扩增出的目的基因在酶作用下形成P1。(3)为了筛选出含有质粒P的菌落，需采用添加的培养基板进行培养，在紫外光激发下的菌落，即为含有P1的菌落。(4)提取经上述筛选所得菌落的RNA,通过获得DNA,再进行PCR扩增，若最终未能检测出目的基因，可能的原因是。进行扩增时需先加热至90~95℃，加入引物后冷却至55~60℃，以上调控温度操作的目的分别是第11页/共11页